检测幽门螺杆菌感染几种方法的比较

自1983年Warrn和Marshall从胃粘膜成功分离出幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori，Hp）后，与胃炎及溃疡病的关系引人关注，并指出Hp可能是其病因之一。检测Hp感染方法较多。本文对95例胃粘膜组织行细菌培养、尿素酶试验、直接涂片、HE染色、Giemsa染色、改良Warthin－Starry银染检测Hp的方法比较。力求寻找出简便、经济、敏感性、特异性高的方法，实用于临床诊断Hp感染。

1　对象和方法

1.1　对象

连续收集1990—03～1990—06因上消化道症状行内镜检查（Olympus GIF XQ[XB]10[/XB]）。胃镜诊断慢性胃炎及消化溃疡患者95例。取距幽门5cm内的胃窦粘膜5块，分别供以上各种检测用。男74例，女21例；17岁～62岁，平均年龄42.8岁；其中慢性胃炎30例、胃溃疡8例，球部溃疡37例，复合溃疡20例。

1.2　方法

①细菌培养：将活检标本接种于肉浸液加8％～10％羊血及抗菌混合液的琼脂平板中，于防良厌氧缺罐（5％O[XB]2[/XB]，7％CO[XB]2[/XB]、80％N2、8％H[XB]2[/XB]、湿度98％）内，37℃、培养3d～7d，见1mm～2mm大小的露滴样、光滑、灰白色菌落，菌落涂片镜检生化鉴定（尿素酶、氧化酶、触酶等）。7d不见菌落为阴性。②尿素酶试验：采用改良Christensen细菌尿素酶鉴定试剂。取0.1ml试剂于平皿圆孔中，将胃粘膜置于此孔中，试剂由淡黄变淡红色为阳性，不变色为阴性，其中1h内变色为阳性，2h～5h变色为延迟性。③直接涂片：粘膜涂于洁净玻片上，范围为1.5cm×2.5cm大小，酒精灯固定，革兰染色，10×100倍油镜观察。Hp为革兰阴性呈∽、C弯曲状或螺旋状，形态典型。④HE染色：常规HE染色，镜检。40×10倍光镜下生病理诊断，100×10锐油镜下观察Hp。Hp位于胃粘膜上皮表面，胃小凹及胃腺腔中，呈淡红变弯曲状物，较难分辨。⑤改良W－S银染：将脱蜡切片于43℃的1％AgNO[XB]3[/XB]液中浸润15min，准备显色剂。将浸染的切片于盛有显色剂立式染缸中加盖、加热维持恒温70℃约8min～10min，切片呈浅棕色。取出切片，热水彻底冲洗，脱水，透明，中性树脂封片。100×10倍镜下观察Hp，其在淡黄色背景上呈棕色或褐色弯曲状物，易辨认。⑥Giemsa染色：将脱蜡切片于Giemsa稀释液中浸染20min，待组织呈蓝色，蒸馏水漂洗，PBS液分色约3min～5min，透明，中性脂封片。100×10倍镜下观察。Hp呈深蓝色弯曲状物，较易分辨。⑦菌量分级：菌Marshall分级法0级；无菌；Ⅰ级：认真寻找可见；Ⅱ级：多数高倍视野可见；Ⅲ级：高倍视野很多或成堆成串。

所有资料按四格表行X[SB]2[/SB]检验，若例数小于40或理论值小于1，则采用确切概率法计算。

2　结果

表1　检测Hp各种方法的检出率

检测方法	n	阳性	阴性	假阳性	假阴性	敏感性(％)	特异性(％)	检出率(％)
细菌培养	95	60	35	0	8	88.2	100.0	63.2
尿素酶试验	95	66	29	1	3	95.6	96.4	69.5
直接涂片	95	58	37	1	10	85.0	96.4	61.1[SB]a[/SB]
HE染色	95	56	39	0	12	69.0	100.0	58.9[SB]a[/SB]
Giemsa染色	95	68	27	2	2	97.1	92.5	71.5
改良W－S	95	71	24	4	1	98.5	86.7	74.7

[SB]a[/SB]P＜0.05

表2　胃粘膜组织切片三种染色菌量分级

染色方法	n	＋	++	+++	－	阳性率(％)
HE	95	27	22	7[SB]b[/SB]	39	58.9
Giemsa	95	16	24	28	27	71.6
改良W－S	95	14	30	27	24	74.7

[SB]b[/SB]P＜0.01

在各种方法中，改良W－S染检出率最高，HE染最低，经X[SB]2[/SB]检验，差异有显著性（P＜0.05）；尿素酶试验、Giemsa染与改良W－S染比较，差异无显著性（P＞0.05）；且其特异性、敏感性均在92％以上。表2之菌量分级，HE染与改良W－S染比较，差异有显著性（P＜0.05）；Giemsa染与改良W－S染比较，差异无显著性（P＞0.05）。

3　讨论

本文对几种常用检测Hp感染的方法进行比较，其敏感性、特异性、检出率及方法难易、速度、费用上均有不同。检出率以改良W－S染最高，HE染最低；特异性以培养法最高。细菌培养是鉴定Hp阳性最可靠的方法，特异性100％，但培养需要一定条件和技术，影响因素多，敏感性较低，时间长，一般单位难以开展。HE染色作病理诊断的同时兼作Hp检测。但其敏感性差，菌量分级少，Hp难以分辨。改良W－S银染是一种检出率最高的经典方法，但其操作方法复杂，显色剂难配制。每次染色需加热、恒温及配显色剂，热水冲洗不彻底，杂质影响观察，银试剂贵耗时耗资。Giemsa染与改良W－S染在检出率及菌量分级方面比较，差异均无显著性（P＞0.05）。特异性高，方法简单、便宜，是较理想的组织切片诊断Hp方法，这与国外学者报道一致。直接涂片Hp呈革兰阴性菌，形态典型，有简单，快速（1h～2h内）之特点，但敏感性低。尿素酶试验具有快速（几min至5h内）、简便、经济、敏感性及特异性高的优点，与直接涂片法联用可提高敏感性及特异性。

尿素酶试验联合直接涂片法是检测Hp感快速、简单、经济、特异性、敏感性高的方法，有利于各级医院临床推广使用；Giemsa染是较理想组织切片诊断Hp感染的方法；培养及改良W－S银染可在有条件单位开展。