幽门螺杆菌感染三种检验方法的比较

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是近年认识的一类与胃炎、消化性溃疡等疾病有关的微生物。众所周知，胃炎和溃疡属于多发常见生物。众所周知，胃炎和溃疡属于多发常见病，而Hp的生长需要特殊的微需氧环境，这在一些基层实验室较难做到。为寻求简单、廉价而又易行的实验方法，我们试图用烛缸法对胃活检标本中Hp的分离、鉴定并与尿素酶试验和涂片镜检对比，报告如下。

1　对象和方法

1.1　对象

1990—04～1990—10内蒙古蒙医学院附属医院做内镜的所有患者，经内镜检查时均在胃窦部和球部和球部钳取粘膜组织两块，放无菌小瓶内，于30min内送检。

1.2　方法

①培养与涂片：标本采集后，立即接种于含有多粘膜素B、万古霉素、两性霉素B、玉米淀粉和药用炭末的甲氧苄嘧啶（TMP）巧克力培养基中。标本接种后将组织块在干净玻片上反复涂抹作细菌涂片革兰染镜检。②取另一块组织放入40孔的酶标板孔中，每孔含尿素酶试剂100μl（0.1ml），用透明胶布封闭，置37℃温箱，分别于1/6h，1/3h，1/2h，1/4h，12h记录颜色出现变化。变为粉红色者为阳性，无为化者为阴性。③生化及耐受试验按幽门螺杆菌（Hp）生化鉴定常规进行。④药敏试验对其中30株培养的细菌按常规纸片法做药敏试验。

2　结果

本组资料计254例标本，其中直接涂片165例Hp阳性，阳性率为65.0％。在涂片上为优势菌，革兰阴性，菌体有1～2个弯曲，呈X形或螺旋形，易于识别。直接尿素酶试验阳性者170份，阳性率66.9％，从时间上看10min阳性者占40.6％，30min占84.1％，4h为97.7％，12h即100％出现阳性。涂片镜检中Hp的数量愈多尿素酶试验出现阳性所要时间则愈短。254例全部进行烛法Hp培养，结果有132例分离出Hp，阳性率为52.0％。该菌在TMP巧克力培养基中生长缓慢，3d～4d时菌落里呈圆点状，直径0.2mm～1mm，光滑，透明，无色有光泽、边缘整齐。生化和耐受试验见表2。本研究所分离出的Hp对痢特灵、四环素、青霉素、氨苄青霉素敏感，对TMP＋SMZ，多粘菌素B和奈定酸抗药。

三种检验方示比较　三种方法检出Hp阳性者173例，阳性率为68.1％。尿素酶试验与镜检结果无显著性差异（P＞0.05），二者符合率为95.3％。尿素酶试验与培养检出率差异有显著性（P＜0.01），二者符合率为77.6％，（表3，4）。

表1　直接尿素酶试验结果

观察时间(h)	1/6	1/3	1/2	1	2	4	12	24	总计
阳性例数	69	112	143	154	159	166	170	170	170/254

表2　Hp的生化特性

氧化酶	过氧化氢酶	尿素酶	马尿酸水解	1％甘氨酸耐受	H[XB]2[/XB]S产生纸条法	硝酸盐还原	3.5％氯化钠耐受	生长温度
								25℃	37℃	42℃
＋	＋	＋	－	＋	＋	－	－	－	＋	－

表3　尿素酶试验与镜检和培养结果比较

	镜　　检			培　　养
	＋		－	＋	－
尿素酶试验	＋	162	8	132	38
	－	3	81	0	84

P＞0.05，尿素酶试验与镜检X[SB]2[/SB]＝0.22；P＜0.01，尿素酶试验培养，X[SB]2[/SB]＝11.79。

表4　三种试验方法比较

指标（％）	尿素酶试验	镜检	培养
灵敏度	98.3	95.4	76.3
差异度	100.0	100.0	100.0
假阳性率	0.0	0.0	0.0
阴性率	1.7	4.7	23.7
阳性预测值	100.0	100.0	100.0
阴性预测值	96.4	91.0	66.4
调整一致性	98.7	96.6	85.7

3　讨论

对254例病人的胃粘膜活标本进行细菌培养，直接尿素酶试验和涂片镜检，共检出Hp阳性者173例，检出率68.1％，与国内一些报道相符。按12h内结果计算，尿素酶试验对诊断Hp感染的灵敏度为98.3％，特异试为100％，与涂片镜检比较二者符合率为95.3％。说明尿素酶试验和涂片镜检对诊断Hp感染准确可靠，快速敏感，简便易行。Hp是微需氧菌，一般分离鉴定需要微需氧环境，由于我们无此设备，烛缸法培养Hp在文献上目前尚未见报道，我们受文献的启发，使用烛缸法，并使其保持一定的湿度和恒定的温度。结果分离鉴定进行比较顺利，但阳性率较尿素酶试验和涂片镜检低，故此，该方法有待继续改进。本研究结果说明，烛缸法是可以用于鉴定Hp的，尤其在无微需氧设备的基层单位可应用此法。药敏结果显示，该菌对痢特灵、四环素、青霉素、红霉素、庆大霉素、氨苄青霉素敏感，所以，对伴有Hp阳性的胃炎、胃十二指肠溃疡病人应首选这药物。

本文所做工作承蒙中国预防医学科学院生物学流行病学研究所微生物研究室陈晶晶教授指导，分离出的Hp菌株曾送该室鉴定，复核证实，特此致谢。