对幽门螺杆菌有效中西药物的筛选
在中药方剂胃忧愈治疗消化性溃疡及伴发幽门螺杆菌（Hp）相关性慢性胃炎取得良好效果，Hp清除率50％的基础上，根据中医理论和临床实践，参照中药研究成果，应用药敏试验方法对清热解毒及可能具有抗菌作用的20种中药进行筛选，选择对Hp有较好抑制作用者制成灭Hp胶囊。选用14种对Hp有效抗生素及各种药物联合进行药敏试验，进一步筛选疗更佳的联合用药组合方案。
1 材料和方法
1.1 材料
Hp菌株分离培养：Hp菌株来自本院胃镜室胃镜检查的慢性胃炎和消化性溃疡患者幽门前区粘膜组织钳取物，直接接种于空肠弯曲菌选择性培养基（英格兰Unipath公司产品）上，置微氧环境，37℃培养72h，检查菌落，革兰染色为阴性杆菌，尿素酶、氧化酶、过氧化氢酶试验阳性。选择从不同患者胃内分离的菌株，生长良好者8株做为药敏试验菌。
1.2 方法
每种药物或联合用革均进行8株从不同个体分离的Hp菌株的敏感试验。平均抑菌直径10mm以内为轻度敏感；10mm～20mm为中度敏感；20mm以上为高度敏感。
1.2.1 有效西药的筛选
将四环素、痢特灵、庆大霉素、红霉素、甲硝唑、De－Nol、羟氨苄青霉素、氟呱酸、氟嗪酸，氨苄青霉素、先锋必素、复达新、西力欣、菌必治14种药物各0.1g，加无菌蒸馏水1ml制成10％溶液。将直径5mm药敏纸片浸入药液，浸透后取出，分别装于干燥无菌瓶内置37℃孵箱内烘干，灭菌后分别贴于已接种好Hp菌的血琼脂平板上，置微氧环境，37℃培养48h，测量抑菌直径。将上述药液0.1ml分别和De-Nol或（和）甲硝唑0.1ml混合，再将上述14种药物按排列组合方法组成3种不同药物的联合，取各种不同的药液各0.1ml相混合，按上述方法进行药敏试验。
1.2.2 有效中药的筛选
将黄连、黄柏、白芍、大黄、连翘、黄芩、白花蛇舌草、乌梅、双花、赤芍、三七、公英、地丁、丹皮、生地、水牛角、川朴、丹参、人参、龙胆草各10g，加水100ml，煎至10ml。将“胃忧愈”5倍浓缩粉剂，锡美散各10g加水50ml，加热煎至10ml，双层纱布过滤，为100％（g/v）原汁。将直径5mm灭菌药敏纸片，无菌操作在高压灭菌后的中药原汁中完全浸泡，浸透后取出，然后贴于已接种好Hp菌的血琼脂平板上，置微氧环境，37℃培养48h，检测抑菌直径。将人参，丹参，“胃忧愈”原汁0.5ml分别与以上单味中药原汁0.5ml混合。再将20种单味中药按排列组合方法，组合成三种药物的混合液（每种0.3ml）进行试验。
2 结果
西药敏感试验中所选药物在培养基上的中度和高度敏感（表1）。四环素、痢特灵、甲硝唑、De－Nol先锋必素为中度敏感；庆大霉素、氨苄青霉素、氟呱酸、红霉素、羟氨苄青霉素、氟嗪酸、复达新、西力欣，菌必治为高度敏感。本文所选药物中，De－Nol与甲硝唑单一抑菌直径为19.88mm±1.21mm，14.50mm±0.74mm，与四环素（21.25±0.78），痢特灵（21.75±1.04），先锋必素（17.63±1.04），羟氨苄青霉素（23.75±0.96）联合则非常显著的增加这几种药物的抑菌作用，较单一用药差异非常显著（P＜0.01）。也显著增加氨苄青霉素（25.50±1.82）、氟呱酸（25.13±1.47）、西力欣（24.25±1.12）、菌必治（26.13±1.76）的抑菌作用（P＜0.05）。De－Nol和甲硝唑联合再与所有单一药物联合均非常显著的增加抑菌作用（P＜0.01或P＜0.05)。联合用药较单一用药抑菌作用增强，这可能与抗生素的作用方式不同而产生协同作用有关。也是克服Hp对某种药物原发耐药的有效方法。三种药物排列组合药物效果，与含De－Nol和甲硝唑的三联药敏效果相比，其效果未见更佳者。另因De－Nol具有杀灭Hp感染仍应采用含De－Nol和甲硝唑的联合治疗。复达新、西力欣、菌必治对Hp抑制作用强，在培养基上单一抑菌效果与其他药物的三联抑菌效果相似，今后如在临床治疗中也达到与三联用药相似的疗效，也可成为一类较好的抗Hp药物。
表1 西药敏感试验结果 （抑菌直径mm，x±s）
| 药物 | 单一药物 | 与De－Nol联合 | 与甲硝唑联合 | 与De－Nol+甲硝唑联合 |
| 四环素 | 16.38±0.43 | 21.25±0.72[SB]b[/SB] | 18.25±1.04[SB]b[/SB] | 23.13±0.96[SB]b[/SB] |
| 痢特灵 | 12.25±1.26 | 21.75±1.04[SB]b[/SB] | 16.63±0.16[SB]b[/SB] | 21.63±1.22[SB]b[/SB] |
| 庆大霉素 | 21.13±0.94 | 21.88±1.64 | 22.13±0.75 | 24.50±1.27[SB]b[/SB] |
| 甲硝唑 | 14.50±0.74 | 20.63±1.57[SB]b[/SB] | ||
| De－Nol | 19.88±1.21 | 21.50±0.48[SB]b[/SB] | ||
| 氟呱酸 | 24.25±1.24 | 25.13±1.47 | 23.63±1.67 | 25.88±2.14[SB]b[/SB] |
| 红霉素 | 20.50±0.96 | 21.75±1.05 | 20.88±1.52 | 22.63±1.76[SB]b[/SB] |
| 羟氨苄 | 21.25±0.80 | 23.75±0.96[SB]b[/SB] | 22.63±1.62[SB]a[/SB] | 26.38±2.03[SB]b[/SB] |
| 先锋必素 | 15.38±1.25 | 17.62±1.64 | 17.50±1.14[SB]b[/SB] | 20.38±1.16[SB]b[/SB] |
| 氟嗪酸 | 23.38±1.52 | 22.38±0.74 | 22.13±1.37 | 25.13±0.84[SB]b[/SB] |
| 氨苄清 | 21.33±0.32 | 22.13±0.63 | 25.50±1.82[SB]b[/SB] | 24.50±2.14[SB]b[/SB] |
| 复达新 | 25.25±1.62 | 25.50±2.14 | 29.88±1.32 | 26.50±2.32a |
| 菌必治 | 24.63±1.24 | 26.13±1.76[SB]a[/SB] | 25.63±1.48[SB]a[/SB] | 26.88±2.16[SB]b[/SB] |
| 西力欣 | 23.50±0.98 | 24.25±1.12[SB]a[/SB] | 24.88±1.32[SB]a[/SB] | 25.88±2.37[SB]b[/SB] |
[SB]a[/SB]P＜0.05，[SB]b[/SB]P＜0.01，υs单一药物。
通过对20种中药的敏感试验，证实在培养基上丹皮、乌梅、大黄、三七、黄连、黄柏、白芍、丹参对Hp均具有抑制作用（表2）。人参与黄连（7.50±0.12），黄柏（7.38±0.08）、白芍（7.25±0.04），三七（7.63±0.22）、丹皮（9.63±0.38）联合可轻度增加抑菌作用，但无统计学意义（P＞0.05）。可使连翘（7.00±0.04），龙胆草（7.25±0.06），白花蛇舌草（7.00±0.02）等出现轻度抑菌作用，丹参与黄柏联合可显著增加抑菌作用（10.10±0.24，P＜0.05），也可使黄连（8.25±0.13）、乌梅（8.38±0.21）、白芍（7.38±0.08）、大黄（8.68±0.14）、丹皮（9.63±0.21）抑菌作用增加，但无统计学意义（P＞0.05）。胃忧愈与8种有效中药联合可显著增加抑菌作用（8.13mm±0.16mm～12.63mm±0.15mm，P＜0.01或P＜0.01）。三种中药联合较单味中药有与人参、丹参的联合用药抑菌作用增强（P＜0.01）。
表2 中药敏感试验结果（抑菌直径mm x±s）
| 药名 | 单味中药 | 与人参联合 | 与丹参联合 | 与胃优愈联合 | 三种药物联合 | |
| 黄连 | 7.38±0.32 | 7.50±0.12 | 8.25±0.13 | 10.13±0.23[SB]*[/SB] | 黄连黄柏乌梅 | 13.38±0.42 |
| 黄柏 | 7.25±0.24 | 7.38±0.08 | 10.10±0.24[SB]a[/SB] | 9.63±0.74 | 黄连赤芍白芍 | 11.25±0.34 |
| 乌梅 | 8.13±0.41 | 8.00±0.02 | 8.28±0.15 | 12.63±0.16[SB]△b[/SB] | 黄连丹皮乌梅 | 13.63±0.14 |
| 白芍 | 7.00±0.08 | 7.25±0.04 | 7.38±0.80 | 10.00±0.14[SB]b[/SB] | 大黄丹皮乌梅 | 13.38±0.26 |
| 三七 | 7.50±0.23 | 7.63±0.32 | 7.25±0.08 | 10.50±0.52[SB]b[/SB] | 乌梅丹皮丹参 | 12.13±0.14 |
| 大黄 | 8.38±0.34 | 8.13±0.16 | 8.63±0.14 | 10.25±0.16[SB]a[/SB] | 丹皮三七乌梅 | 10.50±0.63 |
| 丹皮 | 9.23±0.48 | 9.63±0.30 | 9.63±0.21 | 12.25±0.26[SB]b[/SB] | 丹皮三七乌梅 | 10.38±0.12 |
| 丹参 | 6.88±0.12 | 6.88±0.14 | 8.13±0.16[SB]a[/SB] | 大黄丹皮白花蛇 | 10.25±0.33 |
[SB]a[/SB]P＜0.05，[SB]b[/SB]P＜0.01，υs单味中药。
药敏试验结果显示：单味中药抑菌作用较北，均为轻度敏感，其中以丹皮、大黄、乌梅作用较强。联合用药以“胃忧愈”与8种有效中药分别联用效果增强，达到中度敏感，其中以丹皮、乌梅联用效果较好（抑菌直径12.25±0.26，12.63±0.16）。三种不同中药联用有8组达到中度敏感，其中以黄连、黄柏、乌梅（13.88±0.42）；黄连、丹皮、乌梅（13.63±0.14）；大黄、丹皮、乌梅（13.38±0.26）效果较好。
3 讨论
1983年Marshall和Warren从慢性活动性胃炎患者胃粘膜中分离出Hp后，经研究证实，Hp与慢性胃炎关系密切，与消化性溃疡的顽固不愈和早期复发有关。Hp阳性的消化性溃疡和慢性胃炎经治疗Hp后，消化性溃疡的复发率降低，胃炎得到改善。目前所使用的铋或抗生素单一用药对Hp的根治率在20％以下，联合用药根治率提高；特别是近年报道三联（De－Nol＋甲硝唑＋羟氨苄青霉素或四环素）用药根治率可达85％左右，但联合用药副作用较大，因之，探索对Hp根治率较高而乏副作用的药物和方法为当今治疗Hp相关疾病的重要课题。
近年来，关于中药方剂治疗Hp相关性疾病的研究多系在传统方剂基础上辨证加减或选用具有抗菌作用的中药，尚乏针对抗Hp作用的研究，何种中药对Hp具有杀灭作用尚未明了。为此，我们在胃忧愈治疗消化性溃疡；Hp相关性胃炎取得良好效果；Hp清除率50％的基础上，为进一步加强胃忧愈对Hp的治疗作用，通过对20种可能具有抑制菌作用的清热解毒药进行筛选，结果显示：丹皮、乌梅、大黄、三七、黄连、黄柏、白芍、丹参8种中药对Hp的抑制作用较弱（抑菌直径6.88mm±0.12mm～9.25mm±0.42mm）。联合用药作用增强，特别是与胃忧愈联合或三种有效药物联合达到中度敏感（抑菌直径8.13mm±0.16mm～13.63mm±0.14mm）。加之胃忧愈具有补脾益气、增强脾胃功能、活血化瘀、促进胃组织血液循环，增强胃粘膜屏障功能，促进病变恢复的良好作用。本研究还表明，通过单一或联合药敏试验，De－Nol、甲硝唑、四环素在培养基上对Hp中度敏感，但与其他抗生素联合后可明显增加抗Hp作用，特别是De－Nol和（或）甲硝唑与其他抗生素联合可显著增加抗生素的抗Hp作用，故De－Nol和甲硝唑可做为联合用药的基础。因此设想如何将Hp有效中药加入胃忧愈方剂中组成不同新方，并与基础二联（De－Nol＋甲硝唑）或三联（De－Nol＋甲硝唑＋羟氨苄青霉素或四环素）联用，可望降低三联副作用并获得对Hp根治率高、对病变有治疗作用的有效方法。