第二节 标本采集法
一、血液标本采集法
1.血清标本 测定血液中某些物质的含量（如非蛋白氮，尿素氮等）。
一般常规检验用毛细血管采血法，这种采血法由检验人员执行，血清生化及细菌培养等检验因需要较多量的血液，一般由护理人员协助采血。目前不少生化项目检验已采用微量测定法，故也可采用毛细血管采血法采标本。
（二）静脉采血法
1.用物 同静脉注射法，备干燥注射器（5－10ml），7号针头，标本容器（按需要备干燥试管、抗凝管或血培养瓶），酒精灯，火柴等。
2.操作方法
（1）备齐用物，贴好标签，核对无误后按静脉穿刺法采取所需血量，立即卸下针头，将血液沿管壁缓慢注入试管内，切勿将泡沫注入，避免震荡，以防红细胞破裂而造成溶血。因血液中细胞的内外成分有很大差异，如细胞内钾离子浓度是细胞外的20倍，细胞内的某些酶含量也较细胞外高，如发生溶血，则直接影响检验结果的准确性。
（2）如需全血、血浆，可将血液如上法注入盛有抗凝剂的试管内，立即轻轻摇动，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固。如需作二氧化碳结合力测定时，抽取血液后，应立即注入有石蜡油的抗凝试管中，注入时针头应插入石蜡油面以下，以隔绝空气，立即送验。否则血液中二氧化碳逸出，使检验结果降低，影响准确性。
（3）采集血培养标本时，应防止污染。静脉采血后，将血液注入培养瓶内，一般培养标本用肉汤培养瓶，如做伤寒杆菌培养则备胆汁培养瓶。
临床常用的培养瓶有两种，一种是密封瓶，瓶口除橡胶塞外另加铝盖密封。瓶内盛培养液约50ml，经高压灭菌，使用时将铝盖剔去，用2％碘酒和70％酒精消毒瓶盖，更换针头将抽出的血液注入瓶内，摇匀后送验。另一种是三角烧瓶，瓶口以棉花塞子及纸严密包封，使用时先将封瓶纸松开，取血后将棉塞取出迅速在酒精灯火焰上消毒瓶口，将血液注入瓶内，轻轻摇匀，再将棉塞经火焰消毒后盖好，扎紧封瓶纸送验。一般血培养取血5ml，亚急性细菌性心内膜炎病人，因血中细菌数目较少，为提高细菌培养阳性率，应取血10－15ml.
（4）采血完毕，连同检验单及时送验，清理用物，归还原处。一次性注射器使用后应经消毒液浸泡集中处理。
血液标本采集所需血量视检验目的而定，各医院检验方法不同，其采血量也各异。下面介绍常用检验项目全血、血清标本和放射免疫检验采血量与要求（表17－1，17－2，17－3，17－4）。
表17－1常用全血标本采血量与要求（不需空腹）
| 检验项目 | 采血量（ml） | 标本容器 | 要求 |
| 血氨（BA） | 5.0 | 肝素抗凝 | 立即送验 |
| 血液酸碱度（pH） | 2.0 | 肝素抗凝 | 空针肝素化后方可采血 |
| 二氧化碳分压（PaO[XB]2[/XB]） | 2.0 | 肝素抗凝 | 隔绝空气 |
| 氧分压（PaO[XB]2[/XB]） | 2.0 | 肝素抗凝 | 隔绝空气 |
| 碳酸氢盐 | 2.0 | 肝素抗凝 | 隔绝空气 |
表17－2 常用全血标本采血量与要求（空腹）
| 检验项目 | 采血量（ml） | 标本容器 | 要求 |
| 血沉ESR | 1.6 | 3.8% 枸橼酸钠溶液0.4ml | 充分混匀及时送验 |
| 血糖BG | 1～2 | 抗凝瓶 | 充分混匀及时送验 |
| 二氧化碳结合力(CO[XB]2[/XB]-Cp) | 2.0 | 抗凝瓶 | 充分混匀及时送验 |
| 非蛋白氮(NPN) | 2.0 | 抗凝瓶 | 充分混匀及时送验 |
| 尿素氮(BuN) | 2.0 | 抗凝瓶 | 充分混匀及时送验 |
| 红细胞比积（Hct） | 2.0 | 抗凝瓶 | 充分混匀及时送验 |
| 肌肝(Cr) | 3.0 | 抗凝瓶 | 充分混匀及时送验 |
| 肌酸（Cre） | |||
| 凝血酶元活动度及时间（PT） | 1.8 | 试管内盛3.13％枸橼酸钠0.2ml | 充分混匀及时送验 |
| 纤维蛋白元（Fb） | 2.0 | 抗凝瓶 | 充分混匀及时送验 |
| E－玫瑰花结形成试验（ERT） | 2.0 | 肝素抗凝 | |
| HDL－胆固醇 | 2.0 | 不抗凝 |
表17－3放射免疫检验采血量与要求
| 检验项目 | 采血量（ml） | 要求 | |||
| 甲状腺功能测定 | 总三碘甲状腺原氨酸（TT[XB]3[/XB]） 总甲状腺素（TT[XB]4[/XB]） 促甲状腺激素（TSH） 甲状腺球蛋白抗体（TGA） 甲状腺微粒体抗体（MCA） 3、3[SB]，[/SB]、5[SB]，[/SB]、三碘甲状腺原氨酸γt[XB]3[/XB] | 4.0 | 防止溶血 防止溶血 防止溶血 防止溶血 防止溶血 防止溶血 | ||
| 乙肝检测 | 表面抗原（HBsAg） 表面抗体(HBsAb) e 抗原(HBsAg) e抗体(HBeAb) 核心抗原HBcAg 核心抗体HBcAb | 4．0 | 空腹采血防止溶血 | ||
表17－4常用血清标本采血量与要求
| 检验项目 | 采血量ml | 多项目合并采血量 | 标本容器 | 要求 | |
| 丙氨酸氨基转移酶（ALT） 门冬氨酸氨基转移酶（AST） 胎儿甲种球蛋白（AFP） 乙肝表面抗原（HBsAg） | 1.0 1.0 1.0 1.0 | 4ml | 干燥试管 干燥试管 干燥试管 干燥试管 | 空腹抽血严防溶血 空腹抽血严防溶血 空腹抽血严防溶血 空腹抽血严防溶血 | |
| 黄疸指数（Ⅱ） 总胆红素（TBIL） | 2.0 2.0 | 3ml | 干燥试管 干燥试管 | 空腹抽血严防溶血 空腹抽血严防溶血 | |
| 总胆固醇（Chol） 胆固醇脂（Choiesl） 三酸甘油酯（TC） | 2.0 2.0 2.0 | 3ml | 干燥试管 干燥试管 干燥试管 | 空腹抽血严防溶血 空腹抽血严防溶血 空腹抽血严防溶血 | |
| 血清蛋白（A／G） 蛋白电泳（SPE） | 3.0 2.0 | 3ml | 干燥试管 干燥试管 | 严防溶血 严防溶血 | |
| 碱性磷酸酶（AKP） 血清淀粉酶（AMS） 乳酸脱氢酶（LDH） | 2.0 3.0 3.0 | 干燥试管 干燥试管 干燥试管 | 严防溶血 严防溶血 严防溶血 | ||
| 血钾（K） 血纳（Na） 血钙（Ca） 血氯化物（Cl） | 2.0 2.0 2.0 2.0 | 3ml | 干燥试管 干燥试管 干燥试管 干燥试管 | 严防溶血 严防溶血 严防灰尘污染 严防灰尘污染 | |
| γ－谷氨酰转肽酶（γ－GT） 肥达氏反应（Widal sreaction） 抗O（ASO） 红斑狼疮细胞（LES） | 2.0 3.0 3.0 5.0 | 干燥试管 干燥试管 干燥试管 干燥试管 | 空腹抽血严防溶血 严防灰尘污染 严防灰尘污染 写明时间及时送验 | ||
3．注意事项
（1）根据不同的检验目的，计算所需的采血量，选择试管。
（2）需空腹抽血时，应事先通知病人，避免因进食而影响检验结果（因清晨空腹时血液中的各种化学成分处于相对恒定状态）。
（3）采集血标本应严格执行无菌技术操作，严禁在输液、输血的针头或皮管内抽取血标本，应在对侧肢体采血。
（4）如同时抽取几个项目的血标本，一般应先注入血培养瓶，其次注入抗凝管，最后注入干燥试管，动作要准确迅速。
（5）取血后，应将注射器的活塞略向后抽，以免血液凝固而使注射器粘连并阻塞针头。
1．用物 同静脉穿刺法，另加肝素抗凝剂（表17－5），橡皮泥或橡皮塞。
3．操作方法 用2 ml注射器，连接7号针头，吸1：500肝素生理盐水溶液1ml，将活塞来回抽动，使内壁沾匀肝素，再推掉全部肝素溶液，将活塞推至空筒顶端后不再回拉，以保持注射器内无空气。选择动脉（桡动脉采血比较方便），常规消毒病人的皮肤及操作者的左手食、中指后，以左手绷紧皮肤，右手持注射器，用左手食指触摸动脉搏动处，以45度角进针，见血液自动加入空筒内至2ml后拔出针头，嘱病人按压局部5分钟，应立即用橡皮泥或橡皮塞封闭针头（针头斜面埋入橡皮中即可），以隔绝空气，在手中搓动注射器，使血与肝素混合，立即送验。
表17－5 常用血液抗凝剂
| 剂名 | 抗凝力 | 机理 | 应用 | 禁忌 |
| 10％草酸钾 | 0.2ml抗凝10ml的血 | 与Ca[SB]＋＋[/SB]结合成不溶性草酸钙而抗凝血 | 非蛋白氮二氧化碳结合力 | 血K[SB]＋[/SB] 血Ca[SB]＋[/SB] |
| 草酸钠 | 1 ～2mg抗凝1ml的血 | 与Ca[SB]＋＋[/SB]结合成不溶性草酸钙而抗凝血 | 凝血酶原时间及复钙时间测定 | 血Na[SB]+[/SB] 血Ca[SB]＋[/SB] |
| 3．8％枸橼酸钠 | 6mg抗凝1ml的血 | 与血中生成不溶性离子化的枸橼酸钙，阻止血液凝固 | 血沉1:4 输血1:9 | |
| 双草酸盐（草酸钾、草酸胺） | 0.5ml抗凝5ml的血 | 保持红细胞形态不变 | RBC压积测定 | |
| 草酸钾 氟化钠 | 0.1ml抗凝1ml的血 | 抑制葡萄糖分解而保持血糖浓度 | 血糖测定 | BW N（尿素氮） |
| 肝素 | 0.1ml抗凝5～10ml的血 | 抑制凝血酶元转为凝血酶 | 血氨 血气分析 |
4．注意事项
（1）血标本必须隔绝空气。因为血气分析是指当天大气压条件下，用隔绝空气的血标本与一定浓度的气体相结合，而后测定人体内PH值、氧分压等，作为监测及追踪观察病人的血气情况。血标本中若进入空气将产生误差。因此采血的注射器使用前应检查有无漏气，针头必须连接紧密，标本采集后立即封闭针头斜面。
（2）及时送验。标本采集后应立即送验，如要等待测定，应将标本置于0到4度冰箱内保存不得超过1小时，以免影响检验结果。
二、尿标本采集法
（一）尿常规标本
1．目的 检查尿液的色泽、透明度、比重、尿量、尿蛋白、尿糖定性、细胞和管型等。
2．用物 容量在100ml以上的清洁玻璃瓶1个。
3．操作方法
①备容器贴检验单副联，注明病区、床号、姓名等。
②当晚并待病人留取翌日晨第一次尿液约100ml于标本瓶内。由于晨尿浓度较高，且不受饮食的影响，检验结果更具参考意义。
③留取尿标本时，不可将粪便混于尿液中，以防粪便中的微生物使尿液变质。
④昏迷或尿潴留病人可导尿留取标本，男病人也可用塑料袋固定接尿。女病人在月经期不宜留取尿标本。
（二）尿培养标本
1．目的 取未被污染的尿液作细菌培养及计数，以明确诊断。
2．用物 无菌试管、试管夹、酒精灯及火柴，必要时备外阴冲洗及导尿物一套（见导尿术）。
3．操作方法 女病人留中段尿法：
病人取坐位或卧位，垫便盆，按导尿法清洁、消毒外阴部（轻病人自行清洗），再用0.1%新洁尔灭溶液消毒尿道口，嘱病人自行排尿，护士用试管夹夹住无菌试管，弃去前段尿液，留取中段尿约5ml，留尿前后均应将无菌试管口及棉塞在酒精灯焰上消毒，盖紧棉塞，防止污染。必要时可用导尿法留取。操作完毕，协助病人穿裤，整理用物，及时送验。
男病人留中段尿法基本同女病人法，将尿道口周围彻底消毒后留取即可。
4．注意事项
（1）严格无菌操作，以免污染尿液。采集中段尿时，必须在膀胱充盈情况下进行。
（2）尿内勿混入消毒液，以免产生抑菌作用而影响检验结果。
（三）留12小时或24小时尿标本
1．目的 检查一日尿量及尿内容物，如钠、钾、氯、17－羟类固醇、17－酮类固醇、肌肝、肌酸、尿糖、尿蛋白定量及浓缩查结核杆菌等。
2．用物 备清洁带盖的大口容器（容量为3000－5000ml）。
3．操作方法
（1）备好容器，贴上标签，注明采集的起止时间，并向病人说明留尿的目的、方法。以取得合作。
（2）嘱病人于清晨7时排空膀胱，弃去尿液，记录开始留尿时间，病人解第一次尿时即应加防腐剂（表17－6），使之与尿液混合，防止尿变质；至次晨7时排尽最后一次尿，即24小时尿液全部送验。留12小时尿标本，应从19点开始至次晨7点止。
（3）如作尿肌酸、肌酐、17－羟类固醇、17－酮类固醇、钾、钠、尿糖定量检查，可测定24小时尿总量，记录于检验单上，取出100ml尿液送验，其余弃去。也可将24小时的尿标本分段留取，即：7－11时为第1次，11时－17时为第2次，17－21时为第3次，21时至次晨7时为第4次，作为4段尿糖定性检查。如浓缩检查结核杆菌或作尿蛋白定量检查，则将24小时全部尿液送验。
（四）测定肾功能的尿标本采集法
1．24小时尿比重测定法（浓缩稀释试验法）。
（1）目的 测量肾功能 ，其中主要了解肾小管的调节功能。
（2）用物 6个标本瓶和留12小时尿容器。
（3）操作方法 备好容器贴标签，注明采集时间，在病人在正常饮食情况下进行，上午8时排尿弃去，此后每隔2小时的尿液，分别留于清洁瓶内，共留取6次尿标本送验。20时至次日8时，将尿留入一个标本瓶中送验。
参考值：在正常情况下夜尿量应少于日尿量，夜尿量一般在250－500ml ，最多不超过700ml，如超过此数量，比重固定在1.010 左右，表示肾功能不全。日尿量标本中，其中最高的一次比重应在1.018以上，最低的一次应在1.000 ～1.009.
表17－6常用的防腐剂
| 剂名 | 机理 | 应用举例 |
| 40% 甲醛 | 固定尿中有机成分，抑制细菌生长。 | 爱迪氏计数100ml尿中加0.5ml |
| 甲苯 | 保持尿液的化学成分不变，形成一薄膜覆盖尿液表面，防止细菌污染。 | 尿蛋白定量、尿糖定性加入数滴，测定尿中钾、钠、氯、肌、酐，肌酸等须加入10ml. |
| 浓 盐 酸 | 使尿液在酸性环境中，能防止尿中激素被氧化。 | 17－羟类固醇与17－酮类固醇等检查24小时尿中加5－10ml |
2．酚红排泄试验
（1）目的 测定肾小管排泄功能。
（2）用物 静脉穿刺用物1套，1ml注射器，针头，0.6％酚红1支，标本瓶4个。
（3）操作方法
①备齐用物，贴好标本瓶标签，注明标本采集时间，并向病人说明采取标本的目的及方法，试验前2小时至试验完毕禁吸烟、饮茶。
②嘱病人晨起禁食，排尿弃去后，饮水300－500ml，促进排尿。
③静脉注射酚红溶液6mg，剂量必须准确，并记录注射时间。
④注射后15分钟、30分钟、60分钟及120分钟各收集全尿1次，待全部标本采集后，一同送验。
如采用肌内注射法，则于注射后70分钟、120分钟留全部尿一次。
参考值：排泄率分别为15分钟25％－50％，30分钟15％－25％，60分钟10％－15％，120分钟5％－10％。2小时排泄总量＞55％。
3．内生肌酐清除率试验
（1）目的 测量肾小球滤过率。
（3）操作方法
①患者进低蛋白饮食3天，试验当天勿饮茶或咖啡，避免剧烈运动，清晨嘱病人饮水300ml后排空膀胱，此后准确收集5小时的尿液，并抽血3ml送验。
②测定尿及血中肌酐含量，算出每分钟尿量，再按下式计算内生肌酐清除值。
内生肌酐清除值（ml/min）=尿肌酐浓度（mg/日）×尿量 （ml/min）/血肌酐浓度（ml/日）。
参考值：70-125ml/min.
4.尿素澄清试验
（1）目的 了解肾脏排泄功能。
（3）操作方法
①试验前一日及试验当日，病人进正常饮食，但不可饮茶或咖啡，也不宜作剧烈运动。
②当日早餐后（或饮水300ml，半小时后），排尽尿液弃去，此后准确收集第1小时和第2小时的全部尿液，切勿丢失。
③在2小时之间抽血2ml送验。
④分别测定血液及2次尿液中的尿素含量，并算出每分钟尿量。
参考值：最大清除值60－90ml/分，标准清除值41－68ml／分，清除率65％－125％。
（五）葡萄糖耐量试验
1．目的 测定胰腺功能。正常人服一定量葡萄糖后，血糖随即升高，待一段时间后，血糖恢复到空腹血糖水平。如给一定量葡萄糖负荷后，观察血糖升高、恢复的水平和速度，可间接了解胰岛β细胞的储备功能。
3．操作方法
（1）试验前三天，每日碳水化合物进量不少于300g..
（2）试验前一天晚餐后禁食至试验完毕。
（3）试验日清晨抽血2ml检查血糖，并留尿一次。
（4）将100g葡萄糖溶于300ml开水中，请病人服下，服后半小时、1小时、2小时、3小时、各收集尿标本查尿糖，并分别抽血查血糖，应将标本迅速送验。
参考值：空腹血糖3.9 ～6.2mmol/L,30min<9.5mmol/L, 60min/9.0mmol/L , 2小时≤6.7mmol/L,3小时后恢复至正常水平，每次尿糖均为阴性。
三、粪便标本采集法
（一）粪便常规标本
1．目的 检查粪便颜色、性状、有无脓血、寄生虫卵等。
2．用物 蜡纸盒、竹签。
3．操作方法
（1）将化验单副联贴于蜡纸盒上，注明科室、床号、病人姓名等。
（2）交待病人清晨留取标本，用竹签取5g大便（似蚕豆大小），放入蜡纸盒中送验 。重病人由护士协助留取，如为腹泻病人应取脓、血、粘液等异常部分，如为水样便，可盛于大口玻璃瓶中送验。
（二）粪便培养标本
1．目的 取粪便标本作细菌培养。
2．用物 便盆 清洁蜡纸盒或试管，棉签或肠拭子。
3．操作方法 嘱病人排便于便盆内，用消毒棉签采取粪便的异常部分于蜡纸盒内或试管内，也可用肠拭子蘸等渗盐水，由肛门插入直肠4-5cm处，轻轻转动，取出粪便少许，放入无菌培养试管中，盖好送验。用肠拭子直接采取标本进行培养，可提高阳性率。
1．目的 检查寄生虫数、浓缩集卵、孵化血吸虫毛蚴。
2． 用物 带盖的便器，蜡纸盒，竹签。
3．操作方法
（1）检查寄生虫卵的粪便标本：应从粪便几个不同的部分采集5-10g。如查血吸虫卵，则应采集带血及粘液部分送验；查蛲虫卵，应在23点左右，病人感觉肛门周围发痒时，用无菌棉签蘸生理盐水，自肛门周围皱壁处拭取，然后插入试管内，塞好管口送验。
（2）检查阿米巴原虫的粪便标本；收集标本前，应先将便器加温后再排便，便后连同便盆立即送验（因阿米巴原虫排出体外后因温度突然改变失去活力，不易查到）。
（3）查寄生虫体：病人服驱虫药后，应将大便排于清洁便盆中留取全份粪便，检查蛔虫，钩虫、蛲虫的数目。如驱绦虫，应嘱病人勿用手纸去拉已排出肛门外的虫体，以免拉断虫头不能排出。如第一次大便未见虫头，应告诉病人再留第二次大便送验，只有头节排出才表示驱虫成功。
（4）孵化血吸虫毛蚴的标本；留取粪便50g（鸭蛋大小），必要时留取24小时大便，要及时送验。
（四）隐血标本
1．目的 检查粪便内肉眼不能察见的微量血液。
3．操作方法 嘱病人在检查前三天内禁食肉类、肝类、血类、叶绿素类饮食及含铁剂药物，避免出现假阳性，于第4天留取5g 粪便，置于蜡纸盒内， 及时送验。
四、痰标本采集法
（一）痰常规标本
1．目的 检查痰液中的细菌、寄生虫卵和癌细胞。
2．用物 蜡纸盒或广口瓶。
3．操作方法 嘱病人晨起用清水漱口清洁口腔，然后用力咳出气管深处的痰液，盛于蜡纸盒或广口瓶内，如查癌细胞，瓶内应放10％甲醛溶液或95％酒精溶液固定后送验。
（二）痰培养标本
1．目的 检查痰液中的致病菌。
2．用物 朵贝氏液，无菌培养皿或瓶。
3．操作方法 清晨痰量多，含菌量亦大，嘱病人先用朵贝氏液，再用清水漱口，以除去口腔中细菌，深吸气后用力咳出1－2口痰于培养皿或瓶中，及时送验。
（三）24小时痰标本
1．目的 检查一日痰量，观察痰的性状、颜色、量、气味及内容物（虫卵计数）或浓缩查结核菌。
2．用物 痰杯或广口无色玻璃瓶（容量500ml）。
3．操作方法
（1）容器上的贴好标签，注明起止时间，并作好交接班。
（2）嘱病人将晨7时至次日7时的痰液全部留在容器中送验，不可将漱口液、唾液等混入。
五、分泌物培养标本采集法
（一）目的 检查致病菌，协助诊断。
（二）用物
（三）操作方法
1．咽拭子培养 备齐用物，贴好标签，向病人说明目的以取得合作。点燃酒精灯，将拭子取出蘸无菌生理盐水（必要时以压舌板轻压舌部），嘱病人发“啊”音，以轻快的动作，迅速擦拭两侧腭弓及咽、扁桃体的分泌物后，速将试管口在酒精灯火焰上消毒，将拭子插入试管中塞紧，并立即送验。取霉菌培养标本，须在口腔溃疡面上采取分泌物。
2．伤口分泌物标本 用拭子擦拭伤口分泌物后，速将试管口于酒精灯火焰上消毒，插入拭子塞紧送验。
复习思考题
1．集检验标本有何意义？
2．采集标本的原则是什么？
3．采集全血、血清、血培养标本应各备何种盛血容器？为什么？采集中应注意的事项？
4．如何采集尿常规、12小时24小时的尿标本？
5．如何采集痰标本？
8．常用的血液抗凝剂有哪些？
9．留取尿标本做爱迪氏计数及17－酮类固醇检查时各应选择何种防腐剂？